MSR Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-409650

Descripción general

El gen humano **MTRR** codifica la **reductasa de la sintasa de metionina (MSR)**, una oxidorreductasa dependiente de **FAD/NADPH** que restaura la actividad catalítica de la sintasa de metionina mediante la reactivación reductora de su cofactor **cobalamina**. A través de esta función, la MSR sostiene el **metabolismo de un carbono**, conectando los ciclos del **folato** y la **metionina** con las reacciones de metilación dependientes de **S-adenosilmetionina** y la **remetilación de la homocisteína**. La alteración de MTRR perturba el mantenimiento enzimático dependiente del estado redox y puede modificar la capacidad de metilación celular, la biosíntesis de nucleótidos y las respuestas al estrés metabólico. La variación genética o el deterioro de la función de la MSR se ha asociado con un manejo alterado de la homocisteína y con fenotipos metabólicos relacionados con el folato, relevantes para estudios de biología del desarrollo y del riesgo cardiometabólico.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MSR (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MTRR en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MTRR junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MTRR tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MSR.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MTRR para la investigación de la señalización de MSR, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MTRR críticos para la función de MSR
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MTRR para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MSR CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MSR CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MTRR. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MSR (h) y el plásmido HDR MSR (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MTRR para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MTRR definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.