mSHMT CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-430789

概要

Shmt2は、ミトコンドリア型セリンヒドロキシメチルトランスフェラーゼ（mSHMT）をコードする。mSHMTはピリドキサールリン酸（PLP）依存性酵素であり、ミトコンドリアのワンカーボンサイクルにおいて、セリンとグリシンの可逆的な相互変換を触媒すると同時に、5,10-メチレン-テトラヒドロ葉酸を産生する。この活性は、ヌクレオチド生合成、メチル化反応、ならびにNADPH産生およびミトコンドリア代謝との連関を介した酸化還元恒常性に必要な、葉酸を介する一炭素単位の転移を支える。ミトコンドリア内の葉酸フラックスを調節することで、SHMT2は、急速に分裂する細胞における増殖プログラム、酸化ストレス応答、代謝適応に影響を及ぼす。SHMT2機能の変化は、代謝リプログラミングやゲノム維持の欠陥と関連づけられており、腫瘍生物学やミトコンドリア機能障害の研究において重要である。

mSHMT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるShmt2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Shmt2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Shmt2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、mSHMTタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、mSHMTシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Shmt2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• mSHMTの機能に不可欠なShmt2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Shmt2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• mSHMT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびmSHMT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Shmt2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  mSHMT HDRプラスミド（m）および mSHMT HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはShmt2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のShmt2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。