mSHMT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-430789

Übersicht

Shmt2 kodiert die mitochondriale Serin-Hydroxymethyltransferase (mSHMT), ein pyridoxalphosphatabhängiges Enzym, das im mitochondrialen Ein-Kohlenstoff-Stoffwechsel die reversible Umwandlung von Serin und Glycin katalysiert und dabei 5,10‑Methylen‑Tetrahydrofolat erzeugt. Diese Aktivität unterstützt den folatvermittelten Transfer von C1‑Einheiten, der für die Nukleotidbiosynthese, Methylierungsreaktionen und die Redoxhomöostase erforderlich ist, unter anderem über Verknüpfungen zur NADPH‑Produktion und zum mitochondrialen Stoffwechsel. Durch die Regulation des mitochondrialen Folatflusses beeinflusst SHMT2 Proliferationsprogramme, Reaktionen auf oxidativen Stress und die metabolische Anpassung in schnell teilenden Zellen. Eine veränderte SHMT2‑Funktion wurde mit metabolischer Umprogrammierung und Defekten der Genomstabilität in Verbindung gebracht, was für Untersuchungen zur Tumorbiologie und mitochondrialen Dysfunktion relevant ist.

Das mSHMT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Shmt2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Shmt2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Shmt2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die mSHMT-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Shmt2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der mSHMT-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Shmt2-Exone abzielen, die für die mSHMT-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Shmt2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom mSHMT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom mSHMT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Shmt2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das mSHMT HDR-Plasmid (m) und mSHMT HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Shmt2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Shmt2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.