MRP-S30CRISPR激活质粒(h): sc-411530-ACT

MRPS30 编码线粒体核糖体蛋白 S30（MRP‑S30），是一种由细胞核编码的人类线粒体核糖体 28S 小亚基成分，对线粒体 mRNA 的翻译必不可少。通过支持线粒体 DNA 编码的氧化磷酸化（OXPHOS）亚基的合成，MRP‑S30 促进呼吸链组装、ATP 生成以及线粒体蛋白稳态的维持。线粒体核糖体蛋白的扰动可引发线粒体应激信号传导、生物能量学改变，并改变细胞对凋亡的敏感性。在多种线粒体代谢被重编程的疾病背景中，已有关于 MRPS30 表达变化的报道，因此它是研究线粒体—细胞核通讯与代谢调控的一个有用节点。

MRP-S30 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性MRPS30的表达。

MRP-S30 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的MRPS30基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于MRPS30转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性MRP-S30表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的MRPS30位点，并能够研究内源性位点上依赖于MRP-S30的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在MRPS30表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟MRP-S30通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。