Plasmide CRISPR/Cas9 KO MRE11 (h): sc-401510

Présentation

MRE11 code une nucléase qui forme, avec RAD50 et NBN, le complexe MRN chargé de détecter les cassures double brin de l’ADN et de coordonner la signalisation du point de contrôle dépendante d’ATM. Grâce à ses activités exonucléase 3′–5′ et endonucléase, MRE11 favorise la résection des extrémités de l’ADN, orientant la réparation vers la recombinaison homologue, et stabilise les fourches de réplication bloquées en situation de stress réplicatif. Ce rôle dans le maintien du génome relie MRE11 à l’homéostasie des télomères, à la recombinaison méiotique et à la suppression des réarrangements chromosomiques. La dérégulation de la fonction du complexe MRN est associée à des phénotypes d’instabilité génomique et a été étudiée dans le contexte de la biologie du cancer et des maladies héréditaires de réparation de l’ADN.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MRE11 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MRE11 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MRE11, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MRE11 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MRE11.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MRE11 pour l'étude de la signalisation de MRE11, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MRE11 essentiels à la fonction de MRE11
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MRE11 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MRE11 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MRE11 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MRE11. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MRE11 plasmide HDR (h) et le MRE11 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MRE11 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MRE11 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.