MPDZ Plasmide Double Nickase (h): sc-406839-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MPDZ Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MPDZ Double Nickase Plasmid (h) e il MPDZ Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MPDZ. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MPDZ Plasmide Double Nickase (h) | sc-406839-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MPDZ Plasmide Double Nickase (h2) | sc-406839-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MPDZ codifica una proteina di impalcatura con molteplici domini PDZ che organizza complessi di segnalazione e di traffico intracellulare nelle giunzioni delle cellule epiteliali e neuronali, contribuendo all’assemblaggio delle tight junctions, alla polarità apico-basale e alla regolazione della localizzazione delle proteine di membrana. Collegando partner transmembrana a effettori del citoscheletro e della segnalazione, MPDZ influenza processi quali l’adesione cellula-cellula, la funzione di barriera e il rimodellamento delle giunzioni. Alterazioni della funzione di MPDZ sono state associate a difetti del neurosviluppo e dell’integrità epiteliale, inclusi collegamenti riportati con l’idrocefalo e patologie correlate alle giunzioni. In quanto adattatore “hub-like”, MPDZ è spesso studiato per capire come le interazioni mediate da PDZ coordinino le reti di polarità e la dinamica della segnalazione a livello delle giunzioni.
MPDZ Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MPDZ nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MPDZ. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MPDZ. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MPDZ interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.