Plásmido Doble Nickase (h) MLL2: sc-401659-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)MLL2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa MLL2 (h) y el plásmido de doble nickasa MLL2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a KMT2D. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: MLL2 Anticuerpo (2E1): sc-293217
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) MLL2 | sc-401659-NIC | 20 µg | $410.00 |
KMT2D (MLL2) codifica una metiltransferasa de lisina de histonas que contiene un dominio SET y que cataliza principalmente la mono- y dimetilación de H3K4 en potenciadores (enhancers), apoyando el inicio de la transcripción y programas de expresión génica específicos de cada tipo celular. Como regulador central de la accesibilidad de la cromatina, MLL2 se integra con complejos tipo COMPASS para coordinar el “priming” de potenciadores, el compromiso de linaje y la transcripción sensible a señales a lo largo de vías del desarrollo e inmunitarias. La alteración de KMT2D perturba el control epigenético de la diferenciación y de las redes transcripcionales que responden al daño del ADN, contribuyendo a cambios en la identidad celular y en la regulación del genoma. Estudios genéticos y epigenómicos han vinculado la desregulación de KMT2D con síndromes del desarrollo y con diversos fenotipos de remodelación de cromatina asociados al cáncer, lo que lo convierte en una diana clave en genómica funcional.
MLL2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KMT2D en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KMT2D. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KMT2D. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KMT2D alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.