Partículas Lentivirales de Activación (h) MLK2: sc-406968-LAC

MAP3K10 codifica la quinasa de linaje mixto 2 (MLK2), una MAP quinasa quinasa quinasa que integra señales upstream de estrés e inflamación para regular las cascadas MAPK, en particular las vías de JNK y p38. Mediante la fosforilación de MKKs downstream, MLK2 influye en programas transcripcionales que controlan la apoptosis, las respuestas de citocinas, la dinámica de las neuritas y la remodelación del citoesqueleto. La desregulación de la señalización de MLK2 se ha asociado con cambios en la supervivencia neuronal y en la señalización inflamatoria, lo que respalda su relevancia en la neurodegeneración, la adaptación de células cancerosas al estrés y fenotipos vinculados al sistema inmune en modelos humanos. Como nodo de señalización upstream de múltiples ramas de MAPK, MLK2 se estudia con frecuencia por el crosstalk entre vías, la activación de quinasas específica del estímulo y los efectos dependientes del contexto sobre las decisiones del destino celular.

Las partículas de activación lentiviral MLK2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de MAP3K10 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral MLK2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción MAP3K10, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de MLK2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo MAP3K10 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.