Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) MIS: sc-400715-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)MIS consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa MIS (h) y el plásmido de doble nickasa MIS (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a AMH. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: MIS Anticuerpo (B-11): sc-166752
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) MIS | sc-400715-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) MIS | sc-400715-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La hormona antimülleriana (AMH), también conocida como sustancia inhibidora mülleriana (MIS), es una glicoproteína de la superfamilia TGF-β que señaliza a través de AMHR2 junto con receptores de tipo I para activar programas transcripcionales dependientes de SMAD1/5/8. En humanos, la AMH/MIS regula procesos clave del desarrollo y la reproducción, incluida la regresión de los conductos de Müller en el embrión masculino y la modulación de la foliculogénesis y de la reserva ovárica en mujeres. Su señalización se integra con la regulación más amplia de la vía BMP/TGF-β sobre decisiones de destino celular, proliferación y diferenciación en los tejidos reproductivos. La desregulación de la expresión de AMH o los defectos en la vía de su receptor se han asociado con trastornos del desarrollo sexual y fenotipos de endocrinología reproductiva, y la actividad alterada de la vía de AMH se investiga en contextos de enfermedades gonadales y del tracto reproductor.
MIS El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus AMH en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de AMH. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de AMH. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con AMH alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.