Midnolin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425598

Descripción general

Midn (midnolin) codifica una proteína asociada al nucléolo implicada en la regulación de programas transcripcionales y de la proteostasis, con vínculos descritos con la diferenciación neuronal y las respuestas celulares al estrés. Se piensa que midnolin participa en procesos nucleares que influyen en la biogénesis de ribosomas y el control de calidad de las proteínas, en consonancia con su enriquecimiento en compartimentos nucleolares y nucleares. La expresión alterada de MIDN se ha asociado con fenotipos neurobiológicos y se ha explorado en el contexto de la función de las neuronas dopaminérgicas y de vías relevantes para la neurodegeneración. En modelos de ratón, Midn constituye un nodo abordable para dilucidar cómo la señalización nucleolar se interconecta con la regulación génica durante el desarrollo y la adaptación al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Midnolin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Midn en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Midn junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Midn tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Midnolin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Midn para la investigación de la señalización de Midnolin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Midn críticos para la función de Midnolin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Midn para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Midnolin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Midnolin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Midn. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Midnolin (m) y el plásmido HDR Midnolin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Midn para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Midn definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.