MIAT Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h2): sc-437346-LAC-2

O MIAT humano (transcrito associado ao infarto do miocárdio) é um RNA longo não codificante que atua como um arcabouço regulatório no núcleo e no citoplasma, modulando a expressão gênica por meio de interações com complexos associados à cromatina e também funcionando como RNA endógeno competidor, ao sequestrar microRNAs. Ele influencia programas celulares essenciais, incluindo o controle transcricional, o processamento de RNA, a progressão do ciclo celular, a apoptose e as respostas ao estresse, com efeitos a jusante em redes de sinalização implicadas na biologia vascular, na diferenciação neural e na regulação inflamatória. A expressão desregulada de MIAT foi relatada em contextos cardiovasculares e neurodegenerativos, bem como em múltiplos tipos de câncer, nos quais está associada a alterações na proliferação, na angiogênese e nas decisões de destino celular. A edição gênica ou a perturbação de MIAT permite a dissecação mecanística de circuitos regulatórios mediados por lncRNAs, o mapeamento de eixos miRNA–lncRNA–mRNA e estudos funcionais utilizando modelos de células humanas relevantes para doenças e leituras transcriptômicas/epigenômicas.

As Partículas de Ativação Lentivirais MIAT (h2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais MIAT (h2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição , onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de MIAT. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.