Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MGMT Double Nickase Plasmid (h): sc-400720-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MGMT Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MGMT Double-Nickase-Plasmid (h) und MGMT Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MGMT abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MGMT: sc-166528
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MGMT Double Nickase Plasmid (h) | sc-400720-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MGMT Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400720-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O6-Methylguanin-DNA-Methyltransferase (MGMT) ist ein direktes DNA-Reparaturenzyme, das Alkyladdukte an der O6-Position von Guanin entfernt, indem es die Läsion in einer einmaligen „Suizid“-Reaktion auf ein Cystein im aktiven Zentrum überträgt. Diese Aktivität schützt die genomische Integrität, indem sie Fehlkodierungen und replikationsassoziierte Doppelstrangbrüche verhindert, die aus persistierenden O6-Alkylguanin-Läsionen entstehen können. MGMT wirkt im Rahmen des umfassenderen Netzwerks der DNA-Schadensantwort und -reparatur, das mit Replikationsstress und der mismatch-reparaturabhängigen Verarbeitung von Alkylierungsschäden verknüpft ist. Eine veränderte MGMT-Expression oder Promotor-Methylierung wird breit als bestimmender Faktor für zelluläre Reaktionen auf alkylierende Schäden untersucht und ist relevant für die Tumorbiologie, Mutationssignaturen sowie das Zusammenspiel von DNA-Reparaturwegen.
MGMT Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MGMT-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MGMT abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MGMT-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MGMT-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.