MGMT CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421647

概要

マウスのMgmtは、O-6-メチルグアニンDNAメチルトランスフェラーゼ（MGMT）をコードしている。MGMTは直接修復型のDNA修復酵素であり、グアニンのO6位に生じたアルキル付加体を、活性部位のシステイン残基へ損傷基を転移させる一回限りの「自殺反応」によって除去する。この活性は、内因性および環境由来のアルキル化損傷に起因する変異誘発や複製ストレスに対抗し、ミスマッチ修復の処理や細胞周期チェックポイントシグナル伝達に影響するゲノム維持プログラムとも連携する。MGMTの機能または発現の変化は、アルキル化により誘発されるゲノム不安定性や腫瘍生物学の文脈で広く研究されており、DNA修復能が変異スペクトルや細胞ストレス応答を規定し得る。マウスでは、MgmtはDNA損傷応答経路、組織特異的な修復生物学、ならびにアルキル化損傷と発がんや神経毒性モデルを結び付ける機序を検討するための扱いやすい研究系を提供する。

MGMT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるMgmt遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Mgmt内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Mgmtのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MGMTタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MGMTシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Mgmt欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MGMTの機能に不可欠なMgmtエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Mgmtゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MGMT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびMGMT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Mgmt遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MGMT HDRプラスミド（m）および MGMT HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMgmtホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMgmt標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。