MFSD2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-429366

Übersicht

Mfsd2a kodiert MFSD2, einen Transporter der Major-Facilitator-Superfamily, der an der Lipidhandhabung und der Membranhomöostase beteiligt ist und gut etablierte Funktionen in der Endothelbiologie sowie in der Physiologie von Nervengewebe besitzt. An der Blut-Hirn-Schranke trägt MFSD2 zur Regulation der Transzytose bei und beeinflusst die Bereitstellung von Lysophospholipiden wie LPC-gekoppelten Omega-3-Fettsäuren, wodurch die Integrität der neurovaskulären Einheit und die neuronale Funktion mitbestimmt werden. Eine veränderte MFSD2A-Aktivität wurde mit gestörten Barriereeigenschaften, neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und Veränderungen in inflammatorischen Signalwegen in Verbindung gebracht, die mit endothelialem und metabolischem Stress zusammenhängen. In Mausmodellen bietet Mfsd2a einen gut zugänglichen Ansatzpunkt, um lipidtransportgekoppelte Signalgebung, die Kontrolle der Gefäßpermeabilität und gewebespezifische metabolische Anpassungen zu untersuchen.

Das MFSD2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Mfsd2a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Mfsd2a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Mfsd2a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MFSD2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Mfsd2a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MFSD2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Mfsd2a-Exone abzielen, die für die MFSD2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Mfsd2a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MFSD2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom MFSD2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Mfsd2a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MFSD2 HDR-Plasmid (m) und MFSD2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Mfsd2a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Mfsd2a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.