Mfn2/Mitofusin 2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-431291-ACT

A Mfn2 (Mitofusina 2) murina é uma GTPase conservada da membrana externa mitocondrial que medeia a fusão mitocondrial e coordena a arquitetura da rede mitocondrial com o estado metabólico celular. Para além da fusão, a MFN2 contribui para o acoplamento entre o retículo endoplasmático e as mitocôndrias em membranas associadas às mitocôndrias, moldando a troca de cálcio, o tráfego de lípidos e a sinalização de stress. Essas funções cruzam-se com vias que regulam a fosforilação oxidativa, a homeostase de espécies reativas de oxigénio e o controlo de qualidade mitocondrial, tornando a Mfn2 um nó-chave nas redes de bioenergética e comunicação entre organelos. A atividade desregulada da MFN2 e as alterações na dinâmica mitocondrial estão implicadas em neurodegeneração, disfunção cardiometabólica e fenótipos relevantes para neuropatia periférica, apoiando a sua utilização em modelos mecanísticos de doença.

Mfn2/Mitofusin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Mfn2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Mfn2/Mitofusin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Mfn2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Mfn2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Mfn2/Mitofusin 2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Mfn2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Mfn2/Mitofusin 2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Mfn2/Mitofusin 2 em células tumorais com expressão de Mfn2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.