Mfn1/Mitofusin 1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400637-NIC

MFN1はミトフュージン1（Mfn1）をコードしており、ミトコンドリア外膜に埋め込まれたダイナミン様GTPアーゼとしてミトコンドリア融合を仲介し、ミトコンドリアネットワーク構造の維持に寄与する。Mfn1は、MFN2との同種および異種オリゴマー化、ならびにOPA1依存的な内膜融合との連携を通じて、ミトコンドリア動態、クリステ（稜）の構築、エネルギー産生能に影響を及ぼす。さらにMFN1の活性は、マイトファジー、アポトーシスシグナル、ER―ミトコンドリア接触部位の制御とも交差し、代謝ストレスや品質管理に対する細胞応答を形作る。機序研究では、MFN1が関与するミトコンドリアの融合―分裂バランスの破綻が、神経変性、心代謝機能障害、がんに伴う代謝リモデリングに関与することが示唆されている。

Mfn1/Mitofusin 1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MFN1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MFN1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MFN1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MFN1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。