Plasmide Double Nickase (h) METTL7B: sc-408340-NIC

METTL7B (methyltransferase-like 7B) code une méthyltransférase putative dépendante de la S‑adénosyl‑L‑méthionine, localisée principalement dans les compartiments endomembranaires, à laquelle on attribue des rôles dans la régulation du métabolisme associé aux lipides et des réponses cellulaires au stress. L’expression de METTL7B a été reliée à des voies influençant l’homéostasie membranaire, la signalisation inflammatoire et l’équilibre rédox, ce qui concorde avec son association à un remodelage métabolique dans divers types cellulaires. Des niveaux modifiés de METTL7B ont été observés dans plusieurs contextes pertinents pour les maladies, notamment en biologie du cancer et dans des programmes transcriptionnels associés à la neurodégénérescence, ce qui en fait un nœud utile pour étudier la régulation génique dépendante du contexte. L’étude fonctionnelle de METTL7B appuie des travaux mécanistiques sur les modifications dépendantes de la méthylation de protéines ou de petites molécules, ainsi que sur leurs effets en aval sur l’état cellulaire.

METTL7B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus METTL7B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de METTL7B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de METTL7B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de METTL7B.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.