Plásmido Doble Nickase (h) MerTK: sc-401629-NIC

MERTK codifica la tirosina cinasa receptora MerTK, miembro de la familia TAM, que regula la eferocitosis y la homeostasis inmunitaria al reconocer la fosfatidilserina mediante ligandos puente como GAS6 y PROS1. La activación de MerTK desencadena las vías de señalización PI3K–AKT, MAPK/ERK y STAT, modulando los programas de eliminación de macrófagos y microglía, limitando la producción de citocinas inflamatorias y favoreciendo la remodelación tisular. En biología del cáncer, la señalización aberrante de MerTK se ha relacionado con la supervivencia de las células tumorales, la invasividad y la evasión inmunitaria dentro del microambiente tumoral. En el sistema nervioso y la retina, la fagocitosis dependiente de MerTK es relevante para la eliminación de detritos y la regulación de la inflamación, lo que proporciona un marco para estudiar la desregulación asociada a enfermedad de las vías inmunitarias innatas.

MerTK El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MERTK en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MERTK. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MERTK. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MERTK alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.