Mel-CAM Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-429966-ACT

Il gene murino **Mcam** codifica **Mel-CAM (CD146/MCAM)**, un recettore di adesione della superfamiglia delle immunoglobuline, arricchito sulla superficie cellulare, dove modula le interazioni cellula–cellula e cellula–matrice. Mel-CAM partecipa alla biologia endoteliale e perivascolare, influenzando il rimodellamento del citoscheletro, la migrazione e i processi associati alla barriera attraverso nodi di segnalazione che si intersecano con la dinamica delle adesioni focali e con le vie delle GTPasi della famiglia Rho. In contesti immunitari e stromali, l’espressione di MCAM può modellare il traffico dei leucociti e il rimodellamento tissutale, e la sua deregolazione è stata collegata ad angiogenesi patologica, rimodellamento associato alla fibrosi e fenotipi di progressione tumorale. Queste proprietà rendono **Mcam** un bersaglio utile per analizzare la segnalazione dipendente dall’adesione, la regolazione della nicchia vascolare e i contributi del microambiente a stati cellulari rilevanti per la malattia in modelli murini.

Mel-CAM Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Mcam senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Mel-CAM Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Mcam nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Mcam, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Mel-CAM. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Mcam nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Mel-CAM nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Mel-CAM nelle cellule tumorali con espressione di Mcam silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.