ME3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417146

Panoramica

ME3 umano codifica l’enzima malico mitocondriale NADP-dipendente che catalizza la decarbossilazione ossidativa del malato a piruvato, con produzione concomitante di NADPH. Collegando il ciclo dell’acido tricarbossilico al controllo redox mitocondriale, ME3 sostiene il potere riducente per la biosintesi, la difesa antiossidante e la flessibilità metabolica al variare delle condizioni nutritive. L’attività di ME3 influenza vie coinvolte in anaplerosi/cataplerosi, nel tamponamento delle specie reattive dell’ossigeno e nella funzione mitocondriale, rendendolo rilevante per studi sul rimodellamento metabolico e sullo stress redox. Alterazioni dell’espressione di ME3 o della dipendenza da esso sono state investigate in contesti in cui l’equilibrio del NADPH mitocondriale e il metabolismo ossidativo contribuiscono a fenotipi associati a malattia, inclusi il metabolismo del cancro e la disfunzione mitocondriale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ME3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ME3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ME3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ME3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ME3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ME3 per lo studio della segnalazione di ME3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ME3 critici per la funzione di ME3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ME3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ME3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ME3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ME3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ME3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ME3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ME3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ME3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.