Plasmide CRISPR/Cas9 KO ME3 (h): sc-417146

Présentation

Le gène humain **ME3** code l’enzyme malique mitochondriale dépendante du NADP, qui catalyse la décarboxylation oxydative du malate en pyruvate avec production concomitante de **NADPH**. En reliant le cycle de l’acide tricarboxylique au contrôle rédox mitochondrial, ME3 contribue au pouvoir réducteur nécessaire à la biosynthèse, à la défense antioxydante et à la flexibilité métabolique lorsque les conditions nutritionnelles changent. L’activité de ME3 influence des voies impliquées dans l’anaplérose/cataplérose, le tamponnement des espèces réactives de l’oxygène et la fonction mitochondriale, ce qui la rend pertinente pour l’étude du remodelage métabolique et du stress rédox. Des modifications d’expression de ME3 ou une dépendance accrue à son activité ont été examinées dans des contextes où l’équilibre du NADPH mitochondrial et le métabolisme oxydatif contribuent à des phénotypes associés à des maladies, notamment le métabolisme tumoral et les dysfonctions mitochondriales.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ME3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ME3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ME3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ME3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ME3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ME3 pour l'étude de la signalisation de ME3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ME3 essentiels à la fonction de ME3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ME3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ME3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ME3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ME3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ME3 plasmide HDR (h) et le ME3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ME3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ME3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.