MDH2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402825

概要

MDH2はミトコンドリア型マレート脱水素酵素2をコードしており、トリカルボン酸（TCA）回路において、マレートとオキサロ酢酸の可逆的変換を触媒するNAD⁺依存性の重要な酵素です。ミトコンドリアでのNADH産生量とオキサロ酢酸の利用可能性を制御することで、MDH2は酸化的代謝、アナプレロシス、酸化還元バランスの協調に寄与し、ミトコンドリア呼吸と連動した生合成フラックスを支えます。MDH2の機能は、代謝リプログラミング、活性酸素種（ROS）の処理、ミトコンドリアの品質管理経路と密接に結び付いており、栄養欠乏や低酸素ストレス下での細胞の適応能を形作ります。MDH2の活性や発現の変化は、神経代謝の不均衡や腫瘍に関連する代謝依存性など、ミトコンドリア機能障害に伴う疾患関連表現型に関与することが示唆されています。

MDH2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMDH2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MDH2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MDH2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MDH2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MDH2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MDH2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MDH2の機能に不可欠なMDH2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MDH2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MDH2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMDH2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MDH2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MDH2 HDRプラスミド（h）および MDH2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMDH2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMDH2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。