MCPIP CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401790-ACT

ZC3H12A kodiert MCPIP (auch als Regnase-1 bekannt), eine RNA-bindende Endoribonuklease, die die Expression entzündungsrelevanter Gene begrenzt, indem sie den Abbau von Zytokin- und Chemokin-mRNAs fördert und die miRNA-Biogenese moduliert. MCPIP integriert Signale nachgeschaltet von Rezeptoren des angeborenen Immunsystems und Zytokin-Signalwegen, einschließlich der NF-κB- und MAPK-Kaskaden, und prägt dadurch die Aktivierung von Makrophagen, T‑Zell-Antworten und die Auflösung von Entzündungen. Über die Regulation der Transkriptstabilität und von Differenzierungsprogrammen in Immunzellen wird ZC3H12A mit der gestörten Immunhomöostase in Zusammenhang gebracht, wie sie bei Autoimmun- und chronisch-entzündlichen Erkrankungen beobachtet wird. Seine Aktivität überschneidet sich zudem mit zellulären Stressantworten und apoptosebezogenen Signalwegen, was es für Untersuchungen entzündungsassoziierter Gewebeschäden und von Tumor‑Immun-Interaktionen relevant macht.

MCPIP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ZC3H12A-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MCPIP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ZC3H12A-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ZC3H12A-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MCPIP-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ZC3H12A-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MCPIP-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MCPIP-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ZC3H12A-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.