MB67 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401537-ACT

NR1I3 kodiert den nukleären Rezeptor MB67 (CAR), einen ligandenabhängigen Transkriptionsfaktor, der in menschlichen Zellen die Erkennung von Xenobiotika und adaptive metabolische Antworten reguliert. Nach Aktivierung bildet MB67 ein Heterodimer mit RXR und bindet an regulatorische Elemente, um die Expression arzneistoffmetabolisierender Enzyme und Transporter zu steuern. Dabei integriert er Signalwege wie die durch Cytochrom P450 vermittelte Biotransformation, Konjugationsreaktionen sowie die Homöostase von Gallensäuren und Bilirubin. Über Crosstalk mit entzündlichen und metabolischen Signalnetzwerken beeinflusst NR1I3 hepatozelluläre Stressantworten sowie den systemischen Lipid- und Glukosestoffwechsel. Eine dysregulierte NR1I3-Aktivität wurde mit interindividueller Variabilität der Arzneimittelantwort und einer erhöhten Anfälligkeit für metabolische sowie leberassoziierte Phänotypen in Verbindung gebracht, was seinen Einsatz in mechanistischen Studien zur Entgiftung und zur endokrin-metabolischen Regulation unterstützt.

MB67 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NR1I3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MB67 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NR1I3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NR1I3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MB67-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NR1I3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MB67-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MB67-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NR1I3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.