Plásmido CRISPR de Activación (m) MAPKAPK-2: sc-421557-ACT

El gen Mapkapk2 de ratón codifica MAPKAPK-2 (MK2), una quinasa de serina/treonina que actúa como efector clave de la vía de respuesta al estrés p38 MAPK. Tras su activación, MK2 fosforila sustratos como HSPB1 y tristetraprolina (ZFP36), reprogramando la estabilidad y/o traducción del ARNm y coordinando la producción de citocinas inflamatorias, la dinámica de los gránulos de estrés y la remodelación del citoesqueleto. Mediante el control de la señalización de la inmunidad innata, los puntos de control del ciclo celular y la apoptosis bajo estrés, MAPKAPK-2 contribuye a procesos modelados experimentalmente, incluidos mecanismos de enfermedad inflamatoria, respuestas a lesión tisular y señalización del microambiente asociado a tumores. Su posición en la vía lo convierte en un nodo útil para analizar la regulación transcripcional y postranscripcional dependiente de p38 en células murinas primarias y transformadas.

MAPKAPK-2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Mapkapk2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MAPKAPK-2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Mapkapk2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Mapkapk2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MAPKAPK-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Mapkapk2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MAPKAPK-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MAPKAPK-2 en células tumorales con expresión de Mapkapk2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.