MAP-4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402572-ACT

MAP4 codifica a proteína associada a microtúbulos 4 (MAP-4), um regulador do citoesqueleto expresso de forma ubíqua que se liga aos microtúbulos e os estabiliza para controlar a sua dinâmica durante a intérfase e a mitose. Ao modular a polimerização dos microtúbulos, a MAP-4 influencia o tráfego intracelular, a polaridade celular e a organização do fuso mitótico, impactando assim a progressão do ciclo celular e as respostas ao stress. Alterações na expressão de MAP4 e a remodelação dos microtúbulos estão associadas a fenótipos proliferativos e à instabilidade cromossómica, tendo sido investigadas no contexto da biologia do cancro e da remodelação tecidular. A MAP-4 também é utilizada como um nó mecanístico para estudar a sinalização dependente do citoesqueleto e o posicionamento de organelos em células humanas.

MAP-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAP4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MAP-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAP4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAP4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MAP-4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAP4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MAP-4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MAP-4 em células tumorais com expressão de MAP4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.