MAK CRISPR Activationプラスミド (m): sc-421549-ACT

Mouse Makは、雄性生殖細胞関連キナーゼ（MAK）をコードしている。MAKは細胞周期の制御や分化プログラムに寄与するセリン／スレオニンキナーゼであり、とりわけ線毛関連の生物学において重要な役割を担う。MAKの活性は、有糸分裂の進行の調節や、微小管の構築および中心体機能に影響を与えるリン酸化依存的なシグナル伝達ネットワークの制御と関連づけられている。分化した細胞では、MAKは一次線毛の長さの調節や線毛内輸送に関与するとされ、これらの過程はHedgehogなどのシグナル伝達経路を形作る。MAK関連経路の機能異常は、増殖性の表現型や、線毛依存的な発生・組織恒常性の障害との関連で研究されており、機序に基づく疾患モデリングにおける重要性が示唆されている。

MAK CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Makの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MAK CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Mak 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMak転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MAKの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMak遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMAK依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMak発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMAK経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。