M-CSF CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401339-ACT

CSF1 kodiert den Makrophagen-Kolonie-stimulierenden Faktor (M-CSF), ein sezerniertes Zytokin, das über CSF1R-Signalgebung das Überleben, die Proliferation und die Differenzierung von Monozyten und Makrophagen steuert. Die ligandenabhängige Aktivierung des Rezeptors bindet PI3K–AKT-, MAPK/ERK- und JAK/STAT-Signalwege ein, um die Festlegung der myeloischen Linie, die phagozytische Funktion und die Expression inflammatorischer Gene zu regulieren. In menschlichen Geweben trägt M-CSF zur Osteoklastogenese und zum Knochenumbau bei und prägt die Immun–Stroma-Kommunikation in hämatopoetischen und skelettalen Mikroumgebungen. Eine dysregulierte CSF1/M-CSF-Signalgebung wird mit veränderter Makrophagen-Polarisation und Mustern myeloischer Infiltration in entzündlichen wie auch neoplastischen Kontexten in Verbindung gebracht und unterstützt damit seine Nutzung als mechanistischer Knotenpunkt in der Immunologie und der Forschung zum Tumormikromilieu.

M-CSF Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CSF1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

M-CSF Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CSF1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CSF1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen M-CSF-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CSF1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von M-CSF-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des M-CSF-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CSF1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.