LYRM4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-412759-ACT

LYRM4 umano (LYR motif containing 4), noto anche come ISD11, è una proteina della matrice mitocondriale che funge da cofattore essenziale del complesso desulfurasi della cisteina NFS1, necessario per la biogenesi dei cluster ferro–zolfo (Fe–S). Stabilizzando il macchinario centrale di trasferimento dello zolfo e supportando l’assemblaggio dei cluster Fe–S dipendente dallo scaffold, LYRM4 contribuisce a mantenere l’attività degli enzimi Fe–S–dipendenti coinvolti nella fosforilazione ossidativa, nella traduzione mitocondriale e nell’omeostasi redox. L’alterazione o l’insufficienza di questa via può compromettere la funzione della catena respiratoria, aumentare lo stress ossidativo e compromettere il metabolismo energetico cellulare, collegando la disfunzione mitocondriale associata a LYRM4 ai meccanismi delle malattie neurometaboliche. Di conseguenza, LYRM4 è spesso studiato nel contesto del controllo di qualità mitocondriale, dell’adattamento metabolico e delle relazioni genotipo-fenotipo nei difetti di assemblaggio dei cluster Fe–S.

LYRM4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LYRM4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

LYRM4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LYRM4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LYRM4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di LYRM4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LYRM4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da LYRM4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via LYRM4 nelle cellule tumorali con espressione di LYRM4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.