LYCAT Plasmide Double Nickase (h): sc-415182-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LYCAT Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il LYCAT Double Nickase Plasmid (h) e il LYCAT Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira LCLAT1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LYCAT Plasmide Double Nickase (h) | sc-415182-NIC | 20 µg | $410.00 |
LCLAT1 codifica per la lisocardiolipina aciltransferasi 1 (LYCAT), un’aciltransferasi associata alla membrana che rimodella la lisocardiolipina e altri lisofosfolipidi per mantenere la composizione della membrana mitocondriale e la funzione bioenergetica. Attraverso il rimodellamento della cardiolipina e la riacilazione dei fosfolipidi, LYCAT sostiene l’organizzazione della catena respiratoria mitocondriale, la curvatura di membrana e la segnalazione dipendente dai lipidi. Alterazioni dell’attività di LCLAT1 possono modificare i profili delle catene aciliche della cardiolipina, influenzando l’efficienza della fosforilazione ossidativa e le risposte cellulari allo stress. Questi processi sono rilevanti per la ricerca sulla disfunzione mitocondriale, la riprogrammazione metabolica e i fenotipi associati all’infiammazione osservati in diversi modelli di malattia.
LYCAT Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LCLAT1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LCLAT1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LCLAT1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LCLAT1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.