LXR beta/NER/NR1H2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400691-ACT

NR1H2 codifica o receptor X do fígado beta (LXRβ), um receptor nuclear ativado por ligante que forma heterodímeros com RXR para regular programas transcricionais que controlam o efluxo de colesterol, a homeostase lipídica e a sinalização inflamatória. O LXRβ integra a deteção de esteróis com a expressão de genes metabólicos, influenciando vias como o transporte reverso de colesterol (incluindo a regulação de ABCA1/ABCG1), a biologia das células espumosas de macrófagos e a interação com respostas inflamatórias ligadas ao NF-κB. Em tecidos humanos e modelos celulares, a atividade alterada de LXRβ tem sido associada a uma metabolização lipídica desregulada e a estados inflamatórios relevantes para a aterosclerose, a disfunção metabólica e a neuroinflamação, sustentando estudos mecanísticos em imunometabolismo e neurobiologia.

LXR beta/NER/NR1H2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NR1H2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LXR beta/NER/NR1H2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NR1H2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NR1H2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LXR beta/NER/NR1H2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NR1H2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LXR beta/NER/NR1H2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LXR beta/NER/NR1H2 em células tumorais com expressão de NR1H2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.