Lumican Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402001-NIC

LUM codifica a lumicana, um pequeno proteoglicano secretado, rico em repetições de leucina, da matriz extracelular, que se liga às fibrilas de colágeno e regula a fibrilogênese, a hidratação tecidual e a arquitetura do estroma. A lumicana modula a sinalização célula–matriz e influencia processos como reparo de feridas, migração celular e mecanotransdução, por meio de interações com integrinas e da disponibilidade de fatores de crescimento na matriz. Em tecidos humanos, a expressão de LUM é marcante na córnea, na pele e no estroma conjuntivo, onde contribui para a organização do colágeno e para propriedades da matriz relacionadas à transparência. Níveis desregulados de lumicana e alterações no remodelamento da matriz extracelular têm sido associados a remodelamento fibrótico, microambientes inflamatórios e interações tumor–estroma relevantes para a invasão e a formação de nichos metastáticos.

Lumican O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus LUM em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de LUM. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função LUM. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com LUM interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.