Plásmido CRISPR de Activación (h) LSm1: sc-403980-ACT

El gen humano **LSM1** codifica **LSm1**, una proteína de unión a ARN similar a Sm que se ensambla en el complejo citoplasmático **LSM1–7** para regular el recambio del ARNm. LSm1 promueve la degradación del ARNm de **5′ a 3′** al favorecer el desencapuchado (*decapping*) y coordinarse con los **cuerpos P (P-bodies)**, modulando así la estabilidad de los transcritos y programas de expresión génica vinculados a la proliferación y las respuestas al estrés. Debido a su papel en el control posranscripcional, la alteración de la actividad de LSM1 puede influir en vías asociadas con la transformación oncogénica y el metabolismo del ARN desregulado, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de estados de expresión génica asociados a enfermedades. LSm1 también se utiliza como marcador y como nodo funcional para investigar defectos en el procesamiento del ARN y sus efectos posteriores sobre el comportamiento celular.

LSm1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LSM1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LSm1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LSM1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LSM1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LSm1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LSM1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LSm1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LSm1 en células tumorales con expresión de LSM1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.