LRSAM1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407099

Descripción general

LRSAM1 (repeticiones ricas en leucina y motivo alfa estéril que contiene 1) codifica una ligasa E3 de ubiquitina tipo RING citosólica que contribuye al control de calidad proteico dependiente de ubiquitina y al tráfico endosomal mediante interacciones con TSG101 y otros componentes de la maquinaria ESCRT. Al regular la ubiquitinación y el recambio de sustratos específicos, LRSAM1 influye en la clasificación intracelular, la dinámica de membranas y la homeostasis neuronal. La alteración de la función de LRSAM1 se ha vinculado a la neuropatía periférica, incluida la enfermedad de Charcot–Marie–Tooth tipo 2P, lo que subraya su relevancia para el mantenimiento axonal y las vías de proteostasis. Por lo tanto, LRSAM1 es de interés para estudios sobre señalización por ubiquitina, tráfico vesicular y respuestas de estrés celular asociadas a la neurodegeneración.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO LRSAM1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen LRSAM1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del LRSAM1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de LRSAM1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LRSAM1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en LRSAM1 para la investigación de la señalización de LRSAM1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de LRSAM1 críticos para la función de LRSAM1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de LRSAM1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido LRSAM1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido LRSAM1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus LRSAM1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LRSAM1 (h) y el plásmido HDR LRSAM1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología LRSAM1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana LRSAM1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.