LRRK2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-426167

Panoramica

Lrrk2 codifica la leucine-rich repeat kinase 2 (LRRK2), una chinasi serina/treonina multidominio con attività GTPasica che integra la segnalazione nei compartimenti endomembranosi. Nelle cellule murine, LRRK2 modula il traffico vescicolare e l’omeostasi endolisosomiale tramite la fosforilazione delle GTPasi Rab, influenzando l’autofagia, la dinamica del citoscheletro e il trasporto degli organelli. La funzione di Lrrk2 interseca le vie di segnalazione dell’immunità innata e dell’infiammazione nelle linee mieloidi, plasmando le risposte allo stress cellulare. La disregolazione delle vie legate a LRRK2 è ampiamente studiata nella neurodegenerazione, in particolare nei meccanismi rilevanti per la malattia di Parkinson, nonché in modelli di alterata funzione lisosomiale e neuroinfiammazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LRRK2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Lrrk2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Lrrk2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Lrrk2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LRRK2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Lrrk2 per lo studio della segnalazione di LRRK2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Lrrk2 critici per la funzione di LRRK2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Lrrk2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LRRK2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal LRRK2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Lrrk2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LRRK2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR LRRK2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Lrrk2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Lrrk2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.