Plásmido CRISPR de Activación (h) LRP5: sc-401331-ACT

LRP5 (proteína 5 relacionada con el receptor de lipoproteínas de baja densidad) es un correceptor transmembrana de paso único que regula la señalización canónica Wnt/β-catenina al asociarse con receptores Frizzled para controlar la transducción de señales dependiente de ligando. Mediante la modulación de la estabilización de β-catenina y de la transcripción dependiente de TCF/LEF, LRP5 influye en la diferenciación de osteoblastos, la acumulación de masa ósea y programas más amplios que gobiernan el destino celular, la proliferación y la homeostasis tisular. LRP5 también participa en el crosstalk con antagonistas extracelulares como DKK y la esclerostina, que ajustan la sensibilidad de la vía Wnt en la superficie celular. Las alteraciones genéticas y funcionales de LRP5 se asocian con trastornos de la densidad ósea y del desarrollo vascular ocular, lo que lo convierte en un nodo clave para estudiar fenotipos impulsados por Wnt en células humanas.

LRP5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LRP5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LRP5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LRP5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LRP5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LRP5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LRP5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LRP5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LRP5 en células tumorales con expresión de LRP5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.