Plásmido CRISPR de Activación (h) LRP1B: sc-404088-ACT

LRP1B (proteína 1B relacionada con el receptor de LDL) es un gran receptor endocítico de la familia de los receptores de LDL que participa en la internalización mediada por receptores de ligandos extracelulares y en la modulación de la disponibilidad de proteasas y factores de crecimiento en la superficie celular. A través de sus efectos sobre la endocitosis y el recambio de proteínas de membrana, LRP1B puede influir en el manejo de lípidos, la remodelación de la matriz extracelular y las vías de señalización vinculadas a la adhesión y la migración celular. Se ha informado de una expresión alterada de LRP1B o de disrupciones genómicas en múltiples conjuntos de datos asociados al cáncer, y se estudia en relación con la evolución tumoral, la invasión y características relacionadas con el sistema inmunitario, con interés adicional en la biología neuronal y cardiometabólica. Como resultado, LRP1B se examina con frecuencia como regulador de los procesos de captación celular y de la señalización del microambiente relevante para los mecanismos de enfermedad.

LRP1B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LRP1B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LRP1B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LRP1B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LRP1B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LRP1B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LRP1B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LRP1B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LRP1B en células tumorales con expresión de LRP1B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.