Plásmido CRISPR de Activación (h) LRP1: sc-400638-ACT

LRP1 (proteína 1 relacionada con el receptor de lipoproteínas de baja densidad) es un receptor endocítico y de señalización multifuncional que se une a diversos ligandos, incluidas lipoproteínas que contienen apolipoproteína E, complejos de α2‑macroglobulina con proteasas y factores asociados a la matriz extracelular. Regula la captación y el tráfico mediados por receptores, controla la eliminación de proteasas extracelulares y coordina la señalización a través de vías como MAPK/ERK, PI3K/AKT y TGF‑β de manera dependiente del tipo celular. En humanos, LRP1 influye en el manejo de lípidos, la migración celular y la homeostasis vascular, y se ha implicado en neurobiología por sus funciones en el transporte de amiloide‑β y la regulación sináptica. La expresión o función alteradas de LRP1 se asocian con rasgos cardiometabólicos, procesos relacionados con la aterosclerosis y mecanismos relevantes para la neurodegeneración y el cáncer que involucran la remodelación de la matriz extracelular y la señalización de factores de crecimiento.

LRP1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LRP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LRP1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LRP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LRP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LRP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LRP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LRP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LRP1 en células tumorales con expresión de LRP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.