Plásmido Doble Nickase (h) LPL: sc-400751-NIC

LPL codifica la lipoproteína lipasa, una enzima secretada y anclada al endotelio que hidroliza los triglicéridos de los quilomicrones circulantes y de las VLDL para liberar ácidos grasos libres que serán captados por el músculo y el tejido adiposo. Esta actividad coordina programas de captación, almacenamiento y oxidación de lípidos, y se interseca con procesos de transporte lipídico y remodelación de lipoproteínas que involucran apolipoproteínas y proteoglucanos de heparán sulfato. Debido a su papel central en la depuración de lipoproteínas ricas en triglicéridos, LPL se estudia ampliamente en la homeostasis metabólica y en fenotipos relacionados con la dislipidemia. La alteración de la función o la regulación de LPL se asocia con hipertrigliceridemia y con la biología del riesgo cardiometabólico subsiguiente, lo que la convierte en una diana frecuente para estudios mecanísticos del metabolismo lipídico.

LPL El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LPL en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LPL. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LPL. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LPL alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.