LOXL4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-426632

Panoramica

Loxl4 codifica per la lisil ossidasi-like 4 (LOXL4), un’aminossidasi rame-dipendente che catalizza la deaminazione ossidativa dei residui di lisina nel collagene e nell’elastina, favorendo la reticolazione covalente e la stabilizzazione della matrice extracellulare (ECM). Attraverso il rimodellamento dell’ECM, LOXL4 influenza l’adesione cellulare, la migrazione e i programmi di meccanotrasduzione legati allo sviluppo e alla riparazione dei tessuti. Un’alterata attività della famiglia LOXL è stata associata a rimodellamento fibrotico e a cambiamenti nell’architettura del microambiente tumorale, rendendo Loxl4 rilevante per lo studio della regolazione dell’infiammazione, della biologia vascolare e delle dinamiche epitelio-mesenchimali guidate dall’ECM. Nei sistemi murini, la perturbazione di Loxl4 supporta studi meccanicistici sull’omeostasi del tessuto connettivo e sulle vie di segnalazione dipendenti dalla matrice.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LOXL4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Loxl4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Loxl4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Loxl4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LOXL4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Loxl4 per lo studio della segnalazione di LOXL4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Loxl4 critici per la funzione di LOXL4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Loxl4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LOXL4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal LOXL4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Loxl4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LOXL4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR LOXL4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Loxl4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Loxl4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.