LOXL4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-426632

概要

Loxl4はリシルオキシダーゼ様4（LOXL4）をコードしており、LOXL4は銅依存性のアミンオキシダーゼとして、コラーゲンおよびエラスチン中のリシン残基の酸化的脱アミノ化を触媒し、共有結合性の架橋形成を促進することで細胞外マトリックス（ECM）の安定化に寄与します。ECMリモデリングを介して、LOXL4は組織の発生や修復に関連する細胞接着、遊走、メカノトランスダクションのプログラムに影響を与えます。LOXLファミリーの活性変化は、線維化に伴うリモデリングや腫瘍微小環境の構造変化と関連付けられており、Loxl4はECMを介した炎症、血管生物学、上皮―間葉ダイナミクスの制御を研究する上で重要です。マウス系では、Loxl4の撹乱は結合組織の恒常性やマトリックス依存的シグナル伝達経路の機序解明に役立ちます。

LOXL4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるLoxl4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Loxl4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Loxl4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、LOXL4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、LOXL4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Loxl4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• LOXL4の機能に不可欠なLoxl4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Loxl4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• LOXL4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびLOXL4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Loxl4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  LOXL4 HDRプラスミド（m）および LOXL4 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLoxl4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLoxl4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。