LOC100653515 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-418910

Descripción general

CEP295NL (LOC100653515) es un gen humano anotado como un locus tipo CEP295 y se espera que esté relacionado con la biología asociada al centrosoma, basándose en su homología con miembros de la familia CEP295 implicados en la biogénesis de los centríolos y la maduración del centrosoma. Las proteínas de este ámbito funcional contribuyen a la organización de los microtúbulos, el ensamblaje del huso y la segregación fiel de los cromosomas durante la mitosis, influyendo así en la progresión del ciclo celular y la estabilidad del genoma. La desregulación de la estructura del centrosoma o de su número de copias se asocia con frecuencia a aneuploidía y fenotipos de estrés celular, lo que aporta una justificación para estudiar CEP295NL en contextos proliferativos. La caracterización de LOC100653515 puede ayudar a aclarar cómo los procesos ligados al centrosoma se integran con los puntos de control y las vías de remodelado del citoesqueleto.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO LOC100653515 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CEP295NL en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CEP295NL junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CEP295NL tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LOC100653515.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CEP295NL para la investigación de la señalización de LOC100653515, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CEP295NL críticos para la función de LOC100653515
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CEP295NL para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido LOC100653515 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido LOC100653515 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CEP295NL. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LOC100653515 (h) y el plásmido HDR LOC100653515 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CEP295NL para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CEP295NL definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.