LMX1B Lentiviral Activation Particles (h): sc-402945-LAC

LMX1B kodiert einen LIM-Homeobox-Transkriptionsfaktor, der während der Entwicklung die Festlegung von Zellschicksalen und Differenzierungsprogramme steuert, mit besonders ausgeprägten Funktionen in der dorsalen Musterbildung der Gliedmaßen, der Reifung glomerulärer Podozyten und der Identität dopaminerger Neuronen im Mittelhirn. Durch die Bindung an regulatorische DNA-Elemente und die Koordination kofaktorabhängiger Transkriptionsnetzwerke beeinflusst LMX1B Signalwege, die die Organisation des Zytoskeletts, die Dynamik der extrazellulären Matrix und die linien-/zelltypspezifische Genexpression steuern. Eine veränderte LMX1B-Aktivität steht mit angeborenen Phänotypen von Gliedmaßen und Niere in Zusammenhang und wird häufig im Kontext von Podozyten-Dysfunktion, entwicklungsbezogener Genregulation und neuronaler Spezifizierung untersucht. Als nukleärer Transkriptionsregulator ist LMX1B ein gut zugänglicher Knotenpunkt zur Analyse genregulatorischer Schaltkreise und der enhancervermittelten Kontrolle gewebespezifischer Programme.

LMX1B Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente LMX1B-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

LMX1B Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der LMX1B-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen LMX1B-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen LMX1B-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.