LKLF/KLF2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400918-ACT

KLF2（LKLF）は、ヒト細胞において内皮細胞の静止状態、血管トーン、および抗炎症性遺伝子プログラムを調節するKrüppel様ジンクフィンガー型転写因子をコードします。血行動態やサイトカインからのシグナルを統合し、一酸化窒素（NO）シグナル伝達、白血球接着、凝固に関連する転写ネットワークを調節します。また、MAPKやNF-κBなどの経路とも交差して、細胞の活性化状態の形成に関与します。免疫系細胞系列では、接着受容体やケモカイン応答性の制御を通じて、細胞のトラフィッキングや恒常性維持に関わる分化に影響します。KLF2活性の制御異常は血管炎症やリモデリング表現型と関連づけられており、さらに複数のがん種において、転写再プログラミングが増殖や転移関連プログラムに影響する状況下で、その発現変化が報告されています。

LKLF/KLF2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KLF2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LKLF/KLF2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KLF2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKLF2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LKLF/KLF2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKLF2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLKLF/KLF2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKLF2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLKLF/KLF2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。