LKB1 CRISPR Activation Plasmid (r): sc-437297-ACT

LKB1 (auch als STK11 bekannt) kodiert eine Serin/Threonin-Kinase, die als Masterregulator der zellulären Energiehomöostase fungiert, indem sie Kinasen der AMPK-Familie aktiviert und Stoffwechselstress-Antworten koordiniert. In Rattenzellen integriert LKB1 Signale zu Nährstoffverfügbarkeit und Polarität, um den mitochondrialen Stoffwechsel, die Autophagie und die Aufrechterhaltung der epithelialen Polarität über Signalwege einschließlich der AMPK–mTOR-Signalkaskade zu beeinflussen. Seine Aktivität wirkt sich auf die Zellzyklusprogression und das Überleben unter energiearmen Bedingungen aus und verknüpft den LKB1-Status mit Phänotypen, die eine veränderte Wachstumskontrolle und metabolische Anpassung beinhalten. Eine Fehlregulation LKB1-assoziierter Signalnetzwerke wird umfassend in Zusammenhängen der Gewebehomöostase, Entzündung und onkogener Transformation untersucht, bei denen Programme der Energiesensorik und Polarität gestört sind.

LKB1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (r) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen -Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

LKB1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (r) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des -Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der -Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen LKB1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native -Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von LKB1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des LKB1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem -Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.