LIN-41 Double Nickase Plasmid (h): sc-405036-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das LIN-41 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- LIN-41 Double-Nickase-Plasmid (h) und LIN-41 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TRIM71 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: LIN-41: sc-393352
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
LIN-41 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405036-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LIN-41 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405036-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TRIM71 kodiert die RNA-bindende E3-Ubiquitin-Ligase LIN-41, einen konservierten Regulator der posttranskriptionellen Genkontrolle, der über seine TRIM- und NHL-Domänen die mRNA-Stabilität und Translation koordiniert. LIN-41 ist an Programmen des Entwicklungszeitpunkts und der Stammzellbiologie beteiligt, indem es Differenzierung, Zellzyklusprogression und Proteostase moduliert, und es ist in mikroRNA-vermittelte Regulation eingebunden, einschließlich des let-7-Signalwegs. In menschlichen Zellen wird die TRIM71-Aktivität mit der Aufrechterhaltung der Pluripotenz und Entscheidungen der neuronalen Linienfestlegung in Verbindung gebracht; eine Fehlregulation ist an abnormem Wachstum und Entwicklungsphänotypen beteiligt. Diese Eigenschaften machen TRIM71 zu einem nützlichen Ziel, um RNA-Regulons, ubiquitinabhängige Signalübertragung und Mechanismen der Linienfestlegung zu untersuchen.
LIN-41 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TRIM71-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TRIM71 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TRIM71-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TRIM71-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.