LHX2 Double Nickase Plasmid (h): sc-401071-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das LHX2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- LHX2 Double-Nickase-Plasmid (h) und LHX2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf LHX2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: LHX2: sc-81311
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
LHX2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401071-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LHX2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401071-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LHX2 kodiert einen LIM-Homeobox-Transkriptionsfaktor, der während der Entwicklung die Festlegung von Zelllinien, die Aufrechterhaltung von Vorläuferzellen und die Gewebemusterbildung reguliert. LHX2 wirkt über DNA-Bindung und LIM-Domänen-vermittelte Proteininteraktionen, um Transkriptionsprogramme zu koordinieren, die an Chromatinregulation, Zellschicksalsentscheidungen und Differenzierung in neuronalen, okulären und hämatopoetischen Kontexten beteiligt sind. In adulten Geweben wurde eine veränderte LHX2-Expression mit fehlregulierten entwicklungsbezogenen Gennetzwerken sowie aberranten Proliferations- oder Differenzierungszuständen in Verbindung gebracht. Als kontextabhängiger Regulator wird LHX2 häufig aufgrund seiner Rollen in der Stammzellbiologie, in neuroentwicklungsbezogenen Signalwegen und in transkriptionellen Kontrollmechanismen untersucht, die für krankheitsassoziierte Genexpressionssignaturen relevant sind.
LHX2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des LHX2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von LHX2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die LHX2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit LHX2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.