LHX2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-421425-ACT

Das murine Gen **Lhx2** kodiert den LIM-Homeobox-Transkriptionsfaktor **LHX2**, einen nukleären Regulator, der während der embryonalen und postnatalen Entwicklung die Festlegung von Zellschicksalen, die Gewebemusterbildung und die Aufrechterhaltung der Progenitor-Kompetenz steuert. LHX2 wirkt an Transkriptionsprogrammen mit, die die Neurogenese und die kortikale Arealisierung prägen, die Retinaentwicklung unterstützen und über kontextabhängige Interaktionen mit Kofaktoren und Chromatinregulatoren Entscheidungen zum epithelial–mesenchymalen Zustand beeinflussen. In Stamm- und Progenitor-Kompartimenten trägt die LHX2-Aktivität zur Linienrestriktion, zum Timing der Differenzierung und zum Überleben bei und ist damit mit Signalwegen verknüpft, die entwicklungsbezogene Transkriptionsnetzwerke und die Chromatinzugänglichkeit steuern. Eine fehlregulierte LHX2-Expression wurde in krankheitsrelevanten Modellen mit Entwicklungsdefekten und veränderten proliferativen Zuständen in Verbindung gebracht, was LHX2 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Analyse genregulatorischer Schaltkreise in den Neurowissenschaften und der Entwicklungsbiologie macht.

LHX2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Lhx2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

LHX2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Lhx2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Lhx2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen LHX2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Lhx2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von LHX2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des LHX2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Lhx2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.