Plasmide CRISPR/Cas9 KO Lck (m): sc-421397

Présentation

Lck (tyrosine kinase Src spécifique des lymphocytes) est une kinase de la famille Src qui initie la signalisation du récepteur des cellules T (TCR) en phosphorylant les motifs ITAM de CD3 et en favorisant le recrutement et l’activation de ZAP70, ce qui conduit en aval à l’assemblage du signalosome LAT/SLP-76. Dans les cellules immunitaires murines, Lck régule des événements de signalisation proximaux qui couplent la reconnaissance de l’antigène au flux de calcium, à l’activation de la voie MAPK et à des programmes transcriptionnels contrôlés par NFAT, NF-κB et AP-1, orientant le développement des thymocytes et l’activation des lymphocytes T périphériques. L’activité de Lck est intégrée à la signalisation des co-récepteurs (CD4/CD8) et modulée par un basculement, dépendant de la phosphorylation, entre des conformations active et inactive, ce qui en fait un élément central des seuils de signalisation lymphocytaire. Des voies dépendantes de Lck dérégulées sont fréquemment utilisées comme modèles d’activation immunitaire altérée, de lymphoprolifération et de signalisation aberrante des tyrosine kinases dans des contextes hématopoïétiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Lck (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Lck dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Lck, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Lck à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Lck.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Lck pour l'étude de la signalisation de Lck, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Lck essentiels à la fonction de Lck
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Lck pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Lck plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Lck plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Lck. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Lck plasmide HDR (m) et le Lck (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Lck pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Lck définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.