Plasmide CRISPR/Cas9 KO Lck BP-1 (m): sc-420811

Présentation

Hcls1 code, chez la souris, pour le substrat 1 de Lyn spécifique des cellules hématopoïétiques (Lck BP-1), une protéine adaptatrice enrichie dans les lignées immunitaires qui couple la signalisation des récepteurs antigéniques au remodelage du cytosquelette. Grâce à des interactions dépendantes de la phosphorylation avec les kinases de la famille Src et des complexes régulateurs de l’actine, Lck BP-1 contribue au flux calcique induit par les immunorécepteurs, à l’activation des MAPK et à des modifications dynamiques de la forme cellulaire et de la motilité. Ce nœud de signalisation influence l’activation des lymphocytes, l’adhésion et le trafic cellulaire, reliant les événements proximaux au niveau des récepteurs aux réponses transcriptionnelles en aval. Le dérèglement des voies associées à Hcls1 est pertinent pour l’étude de la signalisation inflammatoire, de l’activation aberrante des cellules immunitaires et de la biologie des cellules hématopoïétiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Lck BP-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hcls1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hcls1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hcls1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Lck BP-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hcls1 pour l'étude de la signalisation de Lck BP-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Hcls1 essentiels à la fonction de Lck BP-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hcls1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Lck BP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Lck BP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hcls1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Lck BP-1 plasmide HDR (m) et le Lck BP-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hcls1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hcls1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.