LBP-9 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404224-ACT

TFCP2L1 codifica il fattore di trascrizione LBP-9, una proteina della famiglia CP2 in grado di legare il DNA e di regolare programmi di espressione genica associati all’identità cellulare, alla differenziazione epiteliale e al controllo trascrizionale durante lo sviluppo. LBP-9 è stato implicato nel mantenimento di stati “stem-like” e nel coordinamento della trascrizione in risposta ai segnali, intersecando vie che influenzano la proliferazione e l’impegno di linea. Un’attività disregolata di TFCP2L1 e reti trascrizionali downstream alterate sono state associate a fenotipi oncogeni e a differenziazione aberrante in molteplici contesti tissutali. In quanto regolatore nucleare, LBP-9 rappresenta un utile punto di accesso per studiare il controllo, dipendente dalla cromatina, di reti geniche rilevanti per la trasformazione e la plasticità cellulare.

LBP-9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TFCP2L1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

LBP-9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TFCP2L1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TFCP2L1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di LBP-9. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TFCP2L1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da LBP-9 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via LBP-9 nelle cellule tumorali con espressione di TFCP2L1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.