Plásmido Doble Nickase (h) LAT1: sc-401609-NIC

SLC7A5 codifica el transportador de aminoácidos tipo L 1 (LAT1), un transportador del sistema L independiente de sodio que forma un heterodímero con SLC3A2 (CD98hc) para mediar la captación de aminoácidos esenciales neutros de gran tamaño, como la leucina, la fenilalanina y la tirosina. Al regular la disponibilidad intracelular de aminoácidos, LAT1 influye en programas de detección de nutrientes, incluida la señalización de mTORC1, el control de la traducción y la adaptación metabólica celular. La actividad de LAT1 sostiene estados proliferativos y de respuesta al estrés al acoplar el transporte de aminoácidos a las demandas redox y bioenergéticas, vinculando el transporte de membrana con redes de señalización de factores de crecimiento y oncogénicas. La alteración de la expresión de SLC7A5 y de la capacidad de transporte de aminoácidos se ha asociado con un metabolismo desregulado en la biología del cáncer y con fenotipos del neurodesarrollo y neurológicos en los que el flujo de aminoácidos afecta a precursores de neurotransmisores y a la homeostasis celular.

LAT1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SLC7A5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SLC7A5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SLC7A5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SLC7A5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.