Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Laminin β-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401105-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Laminin β-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Laminin β-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Laminin β-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf LAMB1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Laminin β-1: sc-17810
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Laminin β-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401105-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Laminin β-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401105-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LAMB1 kodiert Laminin β‑1, eine zentrale Untereinheit mehrerer Laminin-Heterotrimere, die sich zu Basalmembranen zusammenlagern und die Architektur der extrazellulären Matrix organisieren. Über Wechselwirkungen mit Integrinen, Dystroglykan und anderen Matrixkomponenten unterstützt Laminin β‑1 Zelladhäsion, Polarität, Migration und Überleben und beeinflusst dabei Signalwege wie die fokale Adhäsionskinase und PI3K/AKT sowie die Zytoskelettdynamik. In menschlichen Geweben trägt LAMB1 zu den Barriereeigenschaften von Epithel und Endothel bei und steuert Entwicklungsprozesse einschließlich Neuritenauswachsung und Gewebemorphogenese. Eine veränderte Lamininzusammensetzung oder eine gestörte Basalmembranassemblierung unter Beteiligung von LAMB1 wurde mit angeborenen Strukturdefekten in Verbindung gebracht und kann in krankheitsrelevanten Modellen invasive und fibrotische Phänotypen modulieren.
Laminin β-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des LAMB1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von LAMB1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die LAMB1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit LAMB1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.